医学生物实验学教学大纲
The Syllabus of The Experiment Technique of Medical Biology
（供五年制临床专业和麻醉专业本科使用）
前 言
医学生物实验学是临床医学实验课程体系改革中新增设的一门以实验技术为主的课程。是针对细胞生物学和医学遗传学理论知识的补充，是为理论与实验技术手段的融合而开设的新课程。开设本课程的目的是使学生在学习理论知识的同时，从最基本的生物学实验技术开始，逐步掌握医学生物学技术的基本实验原理、基本方法与技术和相关仪器设备的操作方法，巩固和加深对课堂理论知识的理解，为解剖学、组织与胚胎学等其他医学基础课程实验技术的开展奠定基础。并培养学生良好的实验态度和在实验中发现问题、分析问题、解决问题的能力。
本课程需要细胞生物学作基础，医学生物实验学课程的学习将为后续医学遗传学和生物化学课程的学习打下坚实的实验基础。
本大纲参考教材为潘克俭主编，科学出版社《医学生物实验学》，适用于五年制麻醉学专业、临床医学专业本科生的教学。大纲所列教学内容通过理论和实验结合的方式（即讲习结合的教学方式）进行教学。划横线部分为要求学生重点掌握的内容，其他为一般熟悉和一般了解内容。总学时为27学时。
本课程为专业基础课，考核方式为院考。学生课终理论考核以笔试为主，其成绩占总成绩的40％；实验操作占30％；实验报告占30％。
参考学时分配
| 内容 |
理论学时数 |
实验学 时数 |
| 光学显微镜的结构和使用方法 细胞的化学成分观察 |
0 |
3 |
| 光镜下的细胞器 |
0 |
3 |
| 植物细胞骨架制备与观察 |
0 |
3 |
| 动植物细胞有丝分裂装片观察 |
0 |
3 |
| 培养细胞的活力测定 动物细胞融合 |
0 |
3 |
| 设计性实验（一） |
0 |
3 |
| 性染色质标本的制备与观察 PTC尝味实验 |
0 |
3 |
| 人类非显带染色体核型分析 |
0 |
3 |
| 设计性实验（二） |
0 |
3 |
| 合计 |
0 |
27 |
光学显微镜的结构和使用方法
目的要求
掌握光学显微镜的结构和基本使用方法。
熟悉光学显微镜的使用注意事项。
了解光学显微镜各个部件的功能。
教学内容
1、普通光学显微镜的主要结构：机械、照明和光学三部分。机械部分：镜座、镜柱、调焦器、镜臂、镜筒、物镜转换器、载物台；照明部分：光源、反光镜、集光器和光圈；光学部分：目镜、物镜。物镜的种类和性能指标。显微镜的放大倍数。显微镜的成像原理。
2、显微镜的使用方法：低倍镜的使用方法；高倍镜的使用方法；油镜的使用方法；使用后镜头的清洁。
3、使用显微镜的注意事项
4、取数字、毛发装片、蛙血涂片或其它材料装片，按照上述显微镜的正规使用方法和注意事项，反复练习低、高倍镜和油镜的使用，以掌握显微镜的正确使用方法。
细胞的化学成分观察
目的要求
掌握细胞内某些化学成分的显示方法。
熟悉生物绘图的基本方法和要求。
了解细胞内的某些化学成分在细胞内的分布情况。
教学内容
1、鉴定淀粉
自制马铃薯薄壁细胞，由于碘遇淀粉变蓝，可以观察到细胞内有蓝色淀粉颗粒。
2、核酸的观察
原理：核酸分子（RNA、DNA）上磷酸根和碱性染料形成盐键而原位沉淀，由于亲和力高低而分色显示。
操作：取材（洋葱内表皮）→修剪材料→染色（20分钟）→清洗→制片→观察（含RNA的核仁、粗面内质网区域呈红色、细胞核DNA呈绿色）。
3、细胞色素氧化酶的显示。
原理：詹姆斯绿B呈碱性，具有脂溶性，能穿过细胞膜而进入细胞，并通过其结构中带有正电荷的染色基团结合到负电性的线粒体内膜上。其中内膜上的细胞色素氧化酶可使结合的詹姆斯绿B保持氧化状态而呈现蓝色，而在周围的细胞质中染料被还原成为无色。
操作：取人口腔黏膜上皮细胞，单向涂片，滴加詹纳斯绿染料，染色20-30min,染色结束后再盖上盖玻片，镜下观察。细胞质中被染成浅绿色的颗粒状、棒状、条状结构，为线粒体。
光镜下的细胞器
目的要求
掌握显微结构与亚微结构的区别。
熟悉光镜下高尔基体的结构。
了解光学显微镜下叶绿体、中心体的形态结构。
教学内容
1、叶绿体的观察：黑藻叶片临时装片的制备，叶片细胞中叶绿体结构和动态变化的观察。
2、高尔基复合体的观察：取家兔脊神经节切片，观察神经细胞中的高尔基复合体的特征。
3、中心体的观察：取马蛔虫子宫切片，在其受精卵分裂中期的细胞中寻找和观察中心体的特征。
植物细胞骨架制备与观察
目的要求
掌握细胞骨架显示的原理。。
熟悉制备植物细胞骨架各种试剂的作用。
了解水浴锅的使用方法。
教学内容
1、细胞骨架显示的原理
2、制作植物细胞的微丝标本
动、植物细胞的有丝分裂装片观察
目的要求
掌握有丝分裂各时相细胞的主要动态特征。
熟悉动植物细胞有丝分裂过程中的主要区别。
了解显微镜下动、植物细胞有丝分裂的基本过程及分裂各期的形态特征。
教学内容
1、取洋葱根尖切片，观察植物细胞有丝分裂各时期的特点。
2、取马蛔虫受精卵的切片，观察动物细胞有丝分裂各时期的特点。
3、比较两种细胞在有丝分裂过程中的区别。
培养细胞的活力测定
目的要求
掌握死细胞着色法检测细胞活力，血球计数板的计算方法。
熟悉检测细胞死活的方法。
了解检测细胞死活方法的原理。
教学内容
1、取培养中的细胞制备成细胞悬液
2、死细胞着色法——台盼蓝法、苯胺黑法、赤显红法等
3、活细胞着色法——甲苯胺蓝法或亚甲基蓝法
4、悬液与染料混合均匀后，滴加在血球计数板上，计数，计算细胞活力
动物细胞融合
目的要求
掌握PEG介导细胞融合的方法。
熟悉细胞融合的原理。
了解其他细胞融合的方法。
教学内容
1、取培养中的细胞制备成细胞悬液
2、缓冲液冲洗干净后离心，完全弃去上清液
3、弹松沉淀，逐滴滴加PEG
4、加入培养基培养后，分别与5、10、20、30取细胞悬液制成临时装片，观察细胞融合过程
5、计算一定时间内细胞融合率
设计性实验
目的要求
掌握设计性实验的主要原则和方法。
熟悉设计性实验的过程与特点。
了解设计性实验的考核与要求。
教学内容
1、设计性实验概念
2、实验设计应遵循的基本原则
3、实验设计题的“五步思考法”
4、对照实验的四种方法
性染色质标本的制备与观察/PTC尝味实验
目的要求
掌握人类间期细胞核中性染色质的形成机制。
熟悉性染色质标本的制作分析方法。
了解PTC尝味实验方法及这种单基因遗传性状的遗传规律。
教学内容
1、Y染色质的形成机制。
2、X染色质的形成机制。
3、X染色质标本的制作与观察。
擦片→取女性口腔粘膜上皮细胞→涂片→冰醋酸龙胆紫染色→盖片→吸取多余染液→轻压盖片→镜检
4、PTC尝味实验。
由低浓度到高浓度依次品尝不同浓度PTC溶液的味道，尝出苦味为止。并根据尝味浓度判断自己PTC尝味能力的基因型。
人类非显带染色体核型分析
目的要求
掌握染色体的主要类型，染色体的形态结构特征，核型的概念。染色体标本的制备方法。
熟悉人类染色体非显带核型的特征。人类染色体非显带核型分析方法。
了解人类染色体显带核型的种类和应用。
教学内容
一、理论部分
1、染色体的形态特征：姐妹染色单体、主缢痕、短臂、长臂、次级缢痕、动粒、端粒等部位。
2、染色体的类型：中着丝粒染色体、近中着丝粒染色体、近端着丝粒染色体、端着丝粒染色体。
3、核型的概念。
4、人类染色体非显带核型的特征：丹佛体制。
5、人类染色体显带核型的种类，显带的国际命名体制。
二、实验部分：正常人体细胞的核型分析
1、光镜下观察人染色体标本
2、对人染色体照片进行核型分析
附：
常用专业英文词汇表
| 粗面内质网 rough endoplasmic reticulum,RER 溶酶体 lysosome 粗线期 pachytene 带型 banding pattern 单倍体 haploid 点突变 point mutation 动粒 kinetochore 动态突变 dynamic mutation 端粒 telomere 光面内质网 smooth endoplasmic reticulum,RER 核孔 nuclear pore 卵子 ovum 配子 gamete 嵌和体 mosaic 同源染色体 homologous chromosome 细胞表面 cell surface 细胞膜 cell membrane 细胞器 organelle 细胞融合 cell fusion 真核细胞 eukaryotic cell Y-染色质 Y-chromatin |
细胞质 cytoplasm 细胞增殖 cell proliferation 遗传度 heritability 中心体 centrosome 常染色体 autosome 携带者 carrier 着丝粒 centromere 染色质 chromatin 染色体 chromosome 丹佛体制 Denver system 终变期 diakinesis 二倍体 diploid 双线期 diplotene 二分体 dyad 遗传咨询 genetic counseling 遗传病 genetic disease 异染色质 heterochromatin 核型分析 karyotype analysis 性染色质 sex chromatin 姐妹染色单体交换 sister chromatid exchange,SCE 单基因病 single gene disorder X-染色质 X-chromatin |
