课程

生物化学与分子生物学实验

题目

 酪蛋白的制备

学时

讲授

实验

3

练习

行课时间

课次

教 材

《生物化学与分子生物实验学》第1版，宋海星，科学出版社, 2012年

教 具

多媒体课件

教 学

目 的

要 求

1.掌握氨基酸等电点的测定方法；掌握影响蛋白质溶液稳定性的因素及应用；掌握蛋白质结构与功能的关系。

2.熟悉盐析等蛋白质沉淀方法。

3.了解常见蛋白质产量测定方法。

教学重点

难点及其

解决方案

教学重点: 蛋白质的两性解离和等电点，蛋白质含量的经典测定方法。

教学难点: 蛋白质的性质与含量测定之间的关系。

解决方案：讲清楚基本原理和方法，注意归纳要点。

参 考

资 料

1. 屈伸、冯有梅主编，医学生物化学与分子生物学（第2版），科学出版社，2009年

2. 孙培龙、吴石金 主编，生物化学技术实验指导，化学工业出版社，2008年

3. 高继国、郭春绒 主编，普通生物化学教程实验指导，化学工业出版社，2009年

4.  杨建雄编著，生物化学与分子生物学实验技术教程（第二版）,科学出版社，2009年

实 施

情 况

小 结

教学过程、内容及时间分配

教学方法

与手段

一、回顾（5min）

复习上次理论中蛋白质化学中关于沉淀与变性的内容。

二、本次实验内容（25min）

【原理】

酪蛋白在牛乳中的含量约为每升35克，实际上酪蛋白不是一种简单的蛋白质，而是一些含磷蛋白质的混合物。酪蛋白在其等电点时溶解度很低，利用这一性质，将牛乳调至PH4.8，酪蛋白就可以从牛乳中分离出来，酪蛋白不溶于乙醇，这个性质被利用来从酪蛋白粗制剂中除去脂类杂质。

【试剂】

 1．牛乳

 2．醋酸钠缓冲液0.2M,PH４.6

 3．乙醇

 4．乙醚

 5．NaOH

【方法】

讲授法

教学过程、内容及时间分配

教学方法

与手段

【操作步骤的解释】

加入缓冲溶液的目的：达到蛋白质的等电点（酪蛋白的等电点为pH4.55～4.7）；加入乙醇的目的：脱脂肪；加入乙醚的目的：脱水；加入NaOH的目的：溶解。

三、仪器设备的使用(5min）

教学过程、内容及时间分配

教学方法与手段

【离心机使用安全说明】

离心前配平；离心中不能用手触摸机体；一定要在停止旋转后再取离心管。

【滴管的使用】

【水浴箱的使用】

四、学生实验操作(80min）

五、 提问思考及小结(5min）

六、 思考题

1.请问用醋酸缓冲液、蒸馏水、乙醇、丙酮洗涤沉淀的目的分别是什么？

2.最后所得的沉淀中加入0.1N NaOH的作用是什么？

3.制备高产率 酪蛋白的关键是什么？ 

4.请设计另一种提取酪蛋白的方法。 

板书提纲

1. 提取酪蛋白的基本原理。

2. 实验的基本步骤。

3. 离心机使用的注意事项。

讲授法

示教法

讲授法

讨论法