课程

生物化学与分子生物学实验

题目

 双缩脲法测定蛋白质含量

学时

讲授

实验

3

练习

行课时间

课次

教 材

《生物化学与分子生物实验学》第1版，宋海星，科学出版社, 2012年

教 具

多媒体课件

教 学

目 的

要 求

1．掌握各种蛋白质含量测定的基本原理和优缺点，掌握双缩脲法测定蛋白质含量的方法。

2. 掌握分光光度计原理及操作。

3. 了解蛋白质含量测定的方法种类。

教学重点

难点及其

解决方案

教学重点: 双缩脲法测定蛋白质含量的原理及分光光度计的使用。

教学难点: 标准曲线的重要性及操作。

解决方案：讲清楚基本原理，现场示教。

参 考

资 料

1. 屈伸、冯有梅主编，医学生物化学与分子生物学（第2版），科学出版社，2009年

2. 孙培龙、吴石金 主编，生物化学技术实验指导，化学工业出版社，2008年

3. 高继国、郭春绒 主编，普通生物化学教程实验指导，化学工业出版社，2009年

4、杨建雄编著，生物化学与分子生物学实验技术教程（第二版）,科学出版社，2009年

实 施

情 况

小 结

教学过程、内容及时间分配

教学方法与手段

一 讲评上次实验 （5min）

二 复习关于蛋白质含量测定的方法及其应用范围（5min）

三 实验内容（20min）

1. 原理

蛋白质含有两个以上的肽键，因此，有双缩脲反应，在碱性溶液中蛋白质与Cu2＋形成紫红色络合物，其颜色的深浅与蛋白质的浓度成正比，而蛋白质的分子量与氨基酸成份无关。因此，被广泛应用。

在一定的实验条件下，未知样品的溶液与标准蛋白质溶液同时反应，并于540～560nm下比色，可以通过标准蛋白质的标准曲线，求出未知样品的蛋白质浓度，标准蛋白质溶液可以用结晶的牛（或人）血清清蛋白，卵清蛋白或酪蛋白粉末配制。除－CONH-有此反应外——CO NH2，-CH2-NH2，-CS- NH2等基团亦有此反应。

分光光度法。

当一束单色光通过一溶液时，光能被溶液介质吸收一部分。则溶液的浓度C越大，光吸收越强，透射光强度的减弱也越显著。光线减弱的比例与溶液浓度成正比。

2. 意义

血清总蛋白含量关系到血液与组织间水分的分布情况，在机体脱水的情况下，血清总蛋白含量升高，而在机体发生水肿时，血清总蛋白含量下降。所以，测定血清蛋白含量，具有临床意义。

讲授法

教学过程、内容及时间分配

教学方法与手段

3. 操作

取试管５支，按下表操作

4、计算

按郎伯-比尔定律计算样品中酪蛋白含量（3.5%W/V）。

四 仪器操作示教（5min）

1、分光光度计的使用。

2、移液管的使用。

五、学生实验操作（80min）

六、实验总结（5min）

   1、复述实验的意义。

   2、针对学生操作过程中出现的问题，进行纠正和强调。

板书提纲

1. 实验的基本原理

2. 实验操作的基本步骤

3. 郎伯比尔定律

4. 分光光度计的正确使用

讲授法

示教法

讲授法