| 【讲解】（40min）
这节课的内容是人类性染色质标本的制备与分析。
性染色质存在于间期细胞核内，属异染色质，包括X染色质和Y染色质，均来源于相应的性染色体。
一、X染色质
（一）形态、大小、位置
X染色质又称X小体，由Barr首先在雌猫的神经细胞核中发现。它是紧贴于核膜内缘，为碱性染料浓染的染色质块，呈圆形、椭圆形或三角形，其平均直径约1μm。正常女性个体间期细胞核中具有X染色质，而正常男性没有X染色质。为什么正常男女性之间的X染色质存在差异？女性两条X染色体上的基因产物，为什么不比只有一条X染色体的男性的相应基因产物多？ Lyon提出了失活X假说，即Lyon假说解释这些问题。
（二）Lyon假说
Lyon假说要点如下：
（1）女性细胞中的两条X染色体只有一条有转录活性，另一条无转录活性，在间期细胞核中螺旋化呈异固缩状态，形成X染色质。（固缩：高度压缩；异：不同步。）
（2）X染色体的失活是随机的。异固缩的X染色体可以来自父亲也可以来自母亲。但是，一旦某一细胞内的一条X染色体失活，那么由此细胞增殖而来的所有子细胞也总是这一条X染色体失活，即原来是父源的X染色体失活，则其子细胞中失活的X染色体也是父源的。因此，失活是随机的，但是，是恒定的。
（3）失活发生在胚胎早期，大约在人胚第16天。在此之前所有细胞中的X染色体都是有活性的。所以，X染色质属于兼性异染色质。
根据“Lyon假说”X染色质是由正常女性细胞中两条X染色体失活一条形成, 故正常女性有一个X染色质，而正常男性只有一条X染色体，所以没有X染色质。也正是由于女性细胞中两条X染色体中的一条发生异固缩，失去转录活性，保证了男女细胞中都只有一条X染色体保持转录活性，使两性X连锁基因产物的量保持基本相同，这种效应称为剂量补偿。
研究表明，当一个个体的X染色体超过两条时仍只有一条X染色体具有活性，其余的X染色体都要形成X染色质，故：X染色质的数目= X染色体的数目－1（1代表始终有活性的那条X染色体），性发育异常的个体如45，X女性的间期细胞核中无X染色质，又如47，XXY的男性个体具有一个X染色质等。反之，如果知道X染色质的检查情况，也可推导出X染色体的数目，即：X染色体的数目= X染色质的数目+1，如：X染色质（－），则有一条X染色体；X染色质（+），则有两条X染色体；X染色质有三个，则有四条X染色体。（介绍什么是阳性、阴性。）
需指出的是，失活X染色体上的基因并非都失去了活性，有一部分基因仍保持一定活性，因此X染色体数目异常的个体在表型上有别于正常个体，出现多种异常临床症状。如47，XXY的个体不同于46，XY的个体；47，XXX的个体不同于46，XX的个体，而且X染色体越多时，表型的异常更严重。
二、Y染色质
正常男性个体的间期细胞用荧光染料染色后，在细胞核中可见一个强荧光小体，呈圆形或椭圆形，直径约为0.3μm，称为Y染色质或Y小体。Y染色质是由Y染色体长臂远侧约2/3的区段所形成，故细胞中Y染色质的数目与Y染色体的数目相同，例如，正常男性间期细胞核中有一个Y染色质，而具有XYY性染色体的个体，其间期细胞核中可见两个Y染色质。
通常，通过间期细胞中X染色质和Y染色质的检查，可以对个体进行性别鉴定。这种细胞核中染色质的性别差异称为核性别。临床上可利用口腔上皮细胞、羊水细胞和绒毛细胞等的X染色质和Y染色质检查，对疑有某些特定遗传病的胎儿进行性别鉴定，避免性连锁基因病的患儿出生；或对性发育畸形的个体进行鉴别诊断。
这里有两点需要说明：1、以性染色质来鉴定性别时，需同时检查X染色质和Y染色质，否则容易漏诊或误诊。如：45，X与46， XY。2、性染色质检查只是性别鉴定方法之一，另外还可通过其它方法鉴定，如：核型分析。
今天，我们就来制作X染色质标本。Y染色质标本需用荧光染料染色后用荧光显微镜观察，目前暂不具备此条件，因此不做。
三、X染色质标本的制备与观察（边讲边示教）
（一）X染色质标本的制备
1、准备：在实验开始前，先将要用的载玻片和盖玻片用纱布擦干净放在桌上备用。
2、取材与涂片：X染色质检查的材料很多，一般采用口腔粘膜上皮细胞，毛发根部细胞，阴道上皮细胞，子宫颈粘膜细胞，羊水细胞，绒毛膜细胞等等。究竟取什么材料，要根据检查目的，取材方便、经济与否而定。今天这次实验我们就取女同学口腔粘膜上皮细胞来检查X染色质。方法：受检者取消毒竹签，以钝端在口腔内颊适当用力刮取口腔粘膜的深层上皮细胞，单向均匀涂在干净的载玻片中央。注意：①取女同学的口腔粘膜上皮细胞。②取材时，竹签与刮取面夹角不宜过大。 ③刮时适当用力以刮取口腔粘膜的深层上皮细胞，因为深层上皮细胞中活细胞较多，制片效果较好；但用力也不宜过大以免刮破粘膜而出血。④反复刮数次以刮取较多细胞，因为出现率较低，X染色质出现率为17﹪—40﹪（出现率高低与个体不同生理状态有关）。⑤涂片时，只能单向（从左至右或从右至左均可），切勿来回涂抹，避免细胞重叠影响观察。涂片范围约一张盖玻片大小。
3、染色：涂片后加一滴冰醋酸龙胆紫染液，立即盖片，水平放置，将吸水纸放在盖玻片旁边自然吸取多余染液（不要移动盖玻片），镜检。如果，镜下发现细胞以外区域的颜色较深，可将玻片取出，用吸水纸盖在盖玻片上再轻压盖片吸取多余染液后，镜检。
（二）X染色质标本的观察与计数
先在低倍镜下观察，可见口腔粘膜上皮细胞，其核为圆形或卵圆形染成紫蓝色，细胞质浅着色。然后转换为高倍镜，选择较典型的可计数细胞观察X染色质。根据可计数细胞的判断标准及X染色质的判断标准随机观察50个细胞以统计阳性率，我们不作统一要求，能观察多少算多少，但一定要找到X染色质。
四、PTC尝味实验
PTC浓度：1/750000，1/400000-1/50000，1/24000
基因型： TT ， Tt ， tt
苯硫脲(phenylthiocarbamide，PTC)是一种白色结晶状药物，有的人能尝出其苦味，称为PTC尝味者，这决定于显性基因T的存在；有的人几乎不能尝出苦味，称为味盲，这决定于纯合的隐性基因tt的存在。这对基因位于人类的第7号染色体上。在我国汉族人群中，味盲约占10％。
受试者坐下，仰头张嘴。实验者用滴管将4号PTC溶液滴5—6滴于舌根部，令受试者徐徐咽下品味，然后再用滴管将蒸馏水滴5—6滴于舌根部，徐徐咽下品味，比较两种溶液味道。
【布置作业】（1min）
（一）绘正常女性口腔上皮细胞，示X染色质。
（二）思考题
1、孟德尔是如何从杂交试验中得出遗传分离律的？
2、染色体遗传学说是如何确立的？
【辅导学生实验】（87min）
帮助学生正确识别X染色质镜下特征。
【总结实验】（2min）
板书提纲
一、X染色质与莱昂假说
二、Y染色质
三、X染色质标本的制备与观察。
四、PTC尝味实验
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