| 〈组织教学〉指出上次报告中存在的问题。（1min）
【讲解】（19min）
细胞分裂是个体生长和生命延续的基本保证。没有细胞分裂便谈不到生物的遗传、进化和生命的存在。真核细胞的分裂方式一般为无丝分裂（amitosis）、有丝分裂（mitosis）和减数分裂（meiosis）三种。无丝分裂不是细胞的基本分裂类型，在这里不作讲述。减数分裂又称成熟分裂，是一种特殊类型的有丝分裂，只存在于高等生物配子的成熟过程中。有丝分裂是真核细胞增殖的一种普遍方式，指细胞在分裂过程中先出现纺锤体和染色体的一系列变化，然后再出现核、质的分裂。这次课我们将通过在显微镜下观察分裂各期的洋葱根尖细胞和马蛔虫受精卵细胞，来进一步明确有丝分裂的基本过程，分裂各期的形态特征，以及动、植物细胞有丝分裂的异同。首先来看洋葱根尖细胞的有丝分裂。
一、洋葱根尖细胞有丝分裂的观察。
我们用洋葱根尖纵切片来观察，先讲一下洋葱根尖结构（示PPT），由下向上包括根冠、生长点（分生区）、延长区（伸长区）、根毛区（成熟区）。今天主要观察生长点的细胞，因为该处的细胞具有旺盛的分裂能力，大多处于分裂状态，分裂相多。此处细胞的特征是：体积较小，排列紧密，近似正方形，而相邻的根冠处细胞由许多排列不规则的薄壁细胞组成，延长区细胞大多为长方形。
观察切片时（指板书），首先在低倍镜下找到生长点，选择分裂相多的部位换成高倍镜观察，找到各个分裂时期的细胞。（示PPT，讲述各个时期细胞的特点）
间期：是细胞分裂前进行物质准备的时期，形态变化不明显。镜下，间期细胞的细胞壁、细胞质和细胞核均清晰易辨，核呈圆球形、染色质分布均匀，可见1～3个染色深的核仁。
分裂期是物质的分配时期，形态变化明显，包括了核分裂和胞质分裂。根据形态学上的变化，人为地将有丝分裂的核分裂分为前、中、后、末四个时期，这四个时期是一个连续变化的过程，而我们主要是观察每一期的典型特征，特别应注意染色体的变化特征。下面就来看看这分裂各期细胞的主要特征。
前期：核膨大，核内染色质浓缩成丝状染色体，缠绕成团，随前期进展，染色丝逐渐缩短变粗，最后形成一定形态的染色体，核仁解体，核膜消失。
中期：染色体排列在细胞中央赤道面的部位，形成赤道板。赤道板两极可见不十分清晰的纺锤丝形成的纺锤体。中期细胞的染色体达到最大凝缩，形态典型，易于识别，常用来作染色体分析。由于这一期的染色体已完成纵裂，所以在镜下可见到每一条染色体由两条染色单体组成。
后期：染色体分成相等的两组，在纺锤丝牵引下分别向细胞两极移动。（呈“爪”形移动，植物细胞没有动物细胞典型。）
末期：染色体达到细胞两极，开始解螺旋，逐渐伸长变细成染色丝。镜下可见染色体彼此间界线不清变得模糊。最后，染色丝恢复成染色质，核膜形成，核仁出现，纺锤体消失。核分裂完成。
胞质分裂：从晚后期开始，细胞中央出现成膜体（由纺锤体微管、高尔基复合体、内质网膜小泡等组成），再由它融合成细胞板（末期可见），进而形成细胞壁，最后形成两个子细胞。
其次，观察马蛔虫受精卵细胞的有丝分裂。
二、马蛔虫受精卵细胞有丝分裂的观察。
我们用马蛔虫子宫横切片标本，这张切片在看中心粒时已看过，这次主要观察它的分裂过程。在低倍镜下找到受精卵细胞后换高倍镜观察，在镜下找到分裂各期的细胞。（可再次讲解马蛔虫受精卵细胞结构，注意提出极体。）在观察过程中注意与洋葱根尖分裂各期细胞比较，以明确动、植物细胞有丝分裂的异同。
动物细胞与植物细胞的有丝分裂过程是基本一致的。我们主要讲一下不同之处。〈指PPT〉
前期：细胞质中的两个中心体彼此分开，分别移向细胞的两极。其间有纺锤丝相连。
中期：我们第二次实验讲过，由于切面的不同，同一中期细胞可见到两种不同的图像——极面观和侧面观。极面观染色体排列如菊花状，可进行染色体计数，数一数马蛔虫受精卵有几条染色体？侧面观染色体呈分叉横线状排列在细胞中央，两极可各有一个中心体，中心体之间有纺锤丝与染色体着丝粒相连。今天看切片时也应该注意到这两种切面。
胞质分裂：中、晚后期开始，在细胞中部赤道面处胞质向下凹陷，形成分裂沟。细胞质中纺锤体逐渐消失，而细胞中部微管增加，其中掺杂有浓密物质和囊状物，称为中间体。随分裂进行，分裂沟逐渐加深（末期），直达中间体，最后细胞完全分裂成两个子细胞。
大家在观察切片时一定要注意对比观察，洋葱根尖细胞有丝分裂中、末期和马蛔虫受精卵细胞有丝分裂中（极、侧面观）、末期，对比动、植物细胞有丝分裂的中、末期。
三、 培养细胞的活力测定(10min)
（一） 死细胞着色法：死细胞着色，活细胞不着色。
1. 台盼兰：死细胞被染成兰色。台盼兰有轻度的毒性，染色时间不宜太长。染色时间若超过15min以上，活细胞也会因为受损而着色。
2. 苯胺黑：死细胞着黑色。此染料毒性很小。
3. 赤显红B：死细胞着红色。
（二） 活细胞着色法：活细胞着色，死细胞不着色。
1. 结晶紫：活细胞染成兰色。
2. 亚甲基兰：活细胞染成兰色。
3. 甲苯胺兰：活细胞染成兰色。
（三）细胞活力计算方法
细胞总数—死亡细胞数
细胞活力= ╳ 100%
细胞总数
实验内容：
一、台盼兰染色计算细胞活力
于洁净载玻片上，先加20ul骨髓瘤细胞培养物，再加20ul 0.4%台盼兰，打匀，盖片。立即镜检计数。计算细胞活力。
【布置作业】（1min）
（一）绘植物有丝分裂各期图（间、前、中、后、末期各一个）。
（二）思考题
1、有丝分裂因子是如何发现的？
2、细胞周期蛋白是如何发现的？
3、细胞活力测定常用方法有哪几种？
【辅导学生实验】（96min）
帮助学生正确识别有丝分裂各期
【总结实验】（3min）
1、细胞的有丝分裂是连续、动态的过程。根据其形态学上的典型变化，人为地将有丝分裂的核分裂分为前、中、后、末四个时期。前期，核仁、核膜消失，染色质螺旋化形成染色体，并开始纵裂；中期，染色体完成纵裂，排列于细胞中部而形成赤道板；后期，纵裂后的染色单体相互分离，各被一纺锤丝牵引，移向细胞的两极；末期，细胞体分裂，两群染色体结构消失而恢复间期的核结构。
2、动、植物细胞有丝分裂的区别：①植物细胞无中心体，在前期无星体出现，而动物细胞有中心体和星体出现。②胞质分裂：植物细胞靠细胞中央形成细胞板完成，动物细胞靠缢缩环或分裂沟方式完成。
板书提纲
实验四 动植物细胞有丝分裂装片观察
一、洋葱根尖细胞有丝分裂的观察。
1、洋葱根尖的结构。
2、取片（识别正反面）→低倍镜下找生长点→选择分裂相多的部位换为高倍镜→观察（间期及分裂前、中、后、末四个时期的细胞形态特点）。
二、马蛔虫受精卵细胞有丝分裂的观察。
1、马蛔虫子宫横切片标本的层次结构。
2、取片→低倍镜下找受精卵细胞→换高倍镜→观察。
三、动、植物细胞有丝分裂的区别。
四、培养细胞的活力测定
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