课程

医学生物实验学

题目

植物细胞骨架制备与观察

学时

讲授

实验

3

练习

行课时间

  2015年5 月 28日第1-3节

课次

第 3次

教 材

潘克俭.医学生物实验学.北京：科学出版社,2012

教 具

教学PPT、教学视频

教 学

目 的

要 求

1、掌握植物细胞骨架显示的原理。

2、熟悉植物细胞骨架的显示方法。

3、了解植物细胞骨架显示方法的研究历史。

教学重点

难点及其

解决方案

重点：细胞骨架的显示原理

难点：光镜下细胞骨架的识别

解决方案：总结、归纳、图示、对比

参 考

资 料

杨抚华.医学生物学（第七版）.北京：科学出版社,2011

实 施

情 况

小 结

教学过程、内容及时间分配

教学方法与手段

<组织教学>点评上次实验报告。引入新课。

【讲解】（20min）

一、实验目的 ：了解植物细胞骨架的显示方法。

二、试剂：磷酸缓冲液、1%TritonX-100、M-缓冲液、0.2%考马斯亮蓝R250染液、3%戊二醛

三、标本：玉葱鳞叶

四、实验原理：当用1% TritonX-100（一种非离子去垢剂）处理细胞后，可使细胞中的非骨架蛋白发生溶解，而细胞骨架系统的的蛋白质都保留下来，再经戊二醛固定和考马斯亮蓝R250（一种普通的蛋白质染料，也可使细胞骨架蛋白着色）染色后，即可在光镜下观察到着色的细胞骨架（以微丝组成的张力纤维为主）。

五、操作步骤：取材（洋葱内表皮1cm2）→2mlPBS荡洗1次→2mlTritonX-100，37℃，水浴20min→2mlM-buffer荡洗两次

2ml戊二醛固定10min→2mlPBS荡洗1次→2-3滴2%考马斯亮蓝染色5min→自来水荡洗→制片→镜检（细胞内有蓝色、粗细不均的纤维状结构，即为细胞骨架）

【布置作业】（1min）

（一）利用教学互动系统提交电子作业—洋葱鳞叶表皮细胞（示细胞骨架）。

（二）思考题

1. 细胞分裂时细胞骨架发生哪些改变？可以采取哪些研究方法进行检测？

2. 细胞存在微梁吗？

【辅导学生实验】（97min）

   寻找做得好的学生装片作为示教。

【总结实验】当堂登记成绩（2min）

板书提纲                                                                            

实验三  植物细胞骨架制备与观察

取材（洋葱内表皮1cm2）→2mlPBS荡洗1次→2mlTritonX-100，37℃，水浴20min→2mlM-buffer荡洗两次

2ml戊二醛固定10min→2mlPBS荡洗1次→2-3滴2%考马斯亮蓝染色5min→自来水荡洗→制片→镜检

复习提问，对比三种细胞骨架的结构和功能

实物展示

图示、对比

操作空隙，引导学生自我总结，本次实验原理。

小结和答疑

大标题保留至课终以便小结时用

次级标题、重要概念、要点保留至一个大问题讲完后擦掉