课程

医学生物实验学

题目

细胞的化学成分观察

学时

讲授

实验

3

练习

行课时间

2015年05月 14 日第1-3节

课次

第 1次

教 材

潘克俭.医学生物实验学.北京：科学出版社,2012

教 具

多媒体，粉笔

教 学

目 的

要 求

1、掌握普通光学显微镜的正确使用方法。

2、熟悉生物学绘图方法。

3、了解学习显示细胞内某些化学成分的方法。

教学重点

难点及其

解决方案

重点：普通光学显微镜的正确使用方法

难点：生物学绘图方法

解决方案：动画展示、示教

参 考

资 料

杨抚华.医学生物学（第七版）.北京：科学出版社,2011

实 施

情 况

小 结

教学过程、内容及时间分配

教学方法与手段

<组织教学>

    首先自我介绍。介绍课程考核方式，实验课基本要求。安排两个科代表，并分工，一个负责收交实验报告，另一个负责清领试剂耗材和清洁安排。强调4人一组，每组只写一本实验报告，由组长安排，轮流书写，但每组一定写在一本实验报告册上。然后开始上正课。

【讲解】(37min)

一、显微镜的使用

（一）显微镜的结构分为：机械、照明、光学三部分。

1、机械部分：包括（1）镜座；（2）镜柱；（3）镜臂；（4）载物台：通光孔、推片器〈右侧弯形弹簧夹〉、纵横移动手轮（上为纵向、下为横向）〈下左〉、纵横游标尺；（5）镜筒：转轴式（铰链式）双目镜筒，其上接左、右目镜各一，左目镜筒上有一个视度圈，对于左右眼视度不等的同学，可通过调节视度圈，达到双眼同时看清图象的目的；（6）物镜转换器；（7）调焦螺旋：平台升降，外降内升，两调焦螺旋可只调节其中之一，也可两个同时同向调节，但切勿同时反向调节。2、照明部分：（1）电光源：单目在镜座左下方有电源开关和亮度调节柄，双目在镜座右方有一旋钮既是电源开关又是亮度调节钮（外亮内关）；（2）滤光玻片支架框（滤色片框）：可安放不同颜色的滤光玻片，以消除电光源的杂色光；（3）光圈（光阑）；（4）集光器。3、光学部分：（1）目镜：双目镜指针在左或右目镜中；（2）物镜：区分低、高、油镜的方法①看物镜上的主要性能指标②不同物镜上有一圈颜色不同的线为标志，低倍镜-黄，高倍镜-蓝，油镜-白。另外，当按顺时针方向旋转物镜转换器时，物镜由小到大转换。

（二）显微镜的使用方法及注意事项。

取镜→在低倍镜下进行 (开光源→放片→调焦→调整观察标本)→调光→高倍镜

显微镜使用注意事项:

1）取放镜时要用双手，显微镜不可放置在实验桌边缘。

2）不要将照明亮度调至最强状态，不能反复开、关电光源。

3）放玻片标本时一定要正面向上；标本应夹在推片器里，而不是压。

4）转换物镜应用物镜转换器。

5）用粗调焦螺旋上升载物台及转动物镜转换器时，应从侧面注视，避免物镜头与玻片标本相碰。

6）调焦时，转动调焦螺旋时应缓慢。

7）使用高倍镜时，不要随意转动粗调焦螺旋，以免损坏标本或镜头。

8）应养成两眼睁开，用左眼观察（单目），两手并用（右手调焦，左手调推片器）的正规操作习惯。

9）另外应注意，用前检查若有缺损或使用时有损坏，立即报告老师；不得随意取出目镜或拆卸零件；显微镜的光学、照明镜面只能用拭镜纸单向轻轻擦拭。

二、生物学绘图的方法和要求

1、铅笔

2、线表示细胞结构轮廓

3、点表示明暗程度

4、图全称位于图的正下方

5、放大倍数标于图全称下

6、标注线水平向右引

讲授法

讲授法

演示操作

变讲边示范

绘图示范

三、细胞化学成分的观察

我们知道生物体结构和功能的基本单位是细胞，而细胞是由C、H、O、N、等化学元素构成的各种化合物所组成的，也正是这些化合物构成了生命现象的物质基础。那么，我们怎样来鉴定这些构成细胞的化合物呢？细胞化学就是方法之一。细胞化学是指利用特殊的试剂与细胞的特定成分起化学反应引起颜色变化，并用显微镜鉴别所示物质成分的性质和位置的方法。细胞化学方法有许多，今天只选择其中几个介绍给大家。希望大家通过这节课了解细胞内的某些化学成分在细胞内的分布以及学习显示细胞内某些化学成分的方法。

1、碳水化合物的观察

1）原理：碘遇淀粉变蓝。

2）操作：用刀片切取马铃薯块茎一小片，制作临时装片→低倍镜观察（可见薄壁细胞中充满大小不等的卵圆形或圆锥形的颗粒，即淀粉粒）→高倍镜观察（淀粉粒具层纹结构）→吸革兰氏碘液1滴于盖片一测，另一侧用吸水纸吸去多余的水分，使碘液很快渗入细胞→镜检（上述颗粒遇碘液即变蓝色）。

2、核酸的观察

1）原理：甲基绿染液可特异对DNA进行着色。哌洛宁染液可特异对RNA进行着色。

2）操作：取材洋葱鳞叶内表皮1片→浸入甲基绿染液染色5min→  自来水洗去多余染液 →浸入哌洛宁染液染色10min→自来水洗去多余染液→镜检观察（细胞核染成蓝绿色，细胞质染成粉红色）

3）观察：先置低倍镜下找到细胞（长方形），再换为高倍镜观察。

请问，细胞内哪些部位会染成绿色？（核） 哪些部位会染成红色？（①核仁：深红，由于其RNA密度高；②细胞质中粗面内质网区域：浅红，RNA密度不及核仁高。）

另外：由于染料原因核部位实际呈现蓝色，而不是绿色。

3、细胞色素氧化酶的显示

1）原理：线粒体内膜上的细胞色素氧化酶可使詹纳斯绿B保持氧化状态而呈现蓝色,而在周围的细胞质中染料被还原为无色。

2）操作：取人口腔黏膜上皮细胞，涂片，制成临时装片，滴加詹纳斯绿染料，染色20-30min,染色结束后再盖上盖玻片，镜下观察。细胞质中被染成浅绿色的颗粒状、棒状、条状结构，为线粒体。

下面，小组长去领器材盒，开始实验。

【布置作业】(1min)

1.绘甲基绿-哌洛宁染色后的洋葱鳞叶内表皮细胞

思考题：

1、核酸是如何被发现？

2、福尔根反应的原理是什么？

【辅导学生实验】(80min)

   选择做得好的同学的装片，做示教。

【总结实验】 (2min)

板书提纲：

实验一：细胞的化学成分观察

（一）显微镜的使用

（二）生物学绘图的方法和要求

（三）细胞的化学成分观察

1、碳水化合物的观察

2、核酸的观察

3、细胞色素氧化酶的显示

示范切片操作

及时挑选做得好的同学的装片，向全班同学进行示范。一方面可以让同学知道标准，另一方面也可以大大激励同学们的实验积极性。

大标题保留至课终以便小结时用

次级标题、重要概念、要点保留至一个大问题讲完后擦掉