成 都 医 学 院 教 案 首 页
2014级 生物技术专业本科班 任课教师： 杨雨晗
| 课程
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细胞生物学实验技术
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题目
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细胞培养器械、用液的配制和消毒（2）
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学时
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讲授
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0
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| 实验
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3
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| 练习
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0
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| 行课时间
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2015年5月25日 第 3节至5 节
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课次
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第 9 次
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| 教 材
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《医学生物学与细胞生物学实验指导》
李虹，梁素华主编，科学出版社，2014.06 第二版
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| 教 具
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高压灭菌锅、各种细胞培养使用的玻璃器皿和器材
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| 教 学
目 的
要 求
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掌握: 培养器械清洗和消毒，用液灭菌的方法
熟悉: 血清的灭活方法，各种用液的分装和保存原则
了解：建立细胞培养中无菌操作的观念和意识
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| 教学重点
难点及其
解决方案
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教学重点：培养液的配制方法
教学难点：培养器材和培养液的消毒灭菌方法
解决方案：通过视频教学、理论讲述、学生参与实验准备等方式
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| 参 考
资 料
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《细胞生物学实验技术》 章静波等主编，化学工业出版社，第二版，2011
《医学细胞生物学》胡火珍等主编，科学出版社，第7版，2014
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| 实 施
情 况
小 结
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教研室主任签名： 201 年 月 日
成 都 医 学 院 教 案 续 页
| 教学过程、内容及时间分配
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教学方法与手段
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| 一、理论讲授 （30′）
1、视频教学无菌操作的基本要点
2、演示各种材质培养器皿的包装
二、实验操作 （80′或更多）
每组根据自己的实验准备任务，对各用品消毒灭菌，配制试剂。
1、玻璃器皿和金属器材的清洗
2、玻璃器皿和金属器皿的包装
3、玻璃器皿和金属器材的消毒灭菌
4、常用试剂的配制：缓冲液、培养液、血清的分装
5、试剂的消毒灭菌
负责试剂过滤灭菌的小组做好准备工作，开始无菌操作，过滤灭菌。
各组任务：（具体任务分组在课堂上根据学生参与创新性实验的程度来确定）
| 名称
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数量
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负责内容
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负责组
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| 75%酒精和酒精棉球、酒精灯、废液缸、胶头
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5瓶
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每次实验前检查并补充
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2个组
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| 小牛血清
15ml离心管
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100ml
10支
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分装成10ml/支，注意分装离心管事先高压灭菌
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| PBS
10个血清瓶
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2000ml
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分装成10瓶、高压灭菌
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| CO2培养箱、无菌水灭菌
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日常维护、加无菌水
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| 1640培养基
10个血清瓶
滤器
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1000ml
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配好后，过滤除菌，分装成10瓶
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| 胰蛋白酶
青霉素小瓶
滤器
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500ml
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配好后，过滤除菌，分装成若干瓶，-20度保存，用之前复温
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| 盖玻片
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100张
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清洗、泡酸缸、分割、装在培养皿里高压灭菌
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| 计数板和MTT、枪头
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10套
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10套
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| 三尖杉酯碱、Hoechst染液
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2管
2管
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需灭菌
无需灭菌
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小结 （10′）
1、清洗方法和检查方法
2、灭菌方法和注意事项
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讲述法
实验操作法
分小组实验进行实验准备
由各小组在课堂以及课外时间完成器皿的清洗、包装、消毒灭菌工作。
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