| 一、概述 （10′）
1、细胞培养的概念：将细胞从体内分离，并模拟体内生理环境在体外（in vitro）进行培养，从而观察并研究其生长发育等生命现象，即细胞培养（cell culture）。
2、细胞培养的目的：在体外对细胞进行生长增殖发育药敏等研究。它是细胞生物学乃至整个生命科学领域最基本的研究技术。这里仅介绍动物细胞的分离及培养技术。
3、关键：离体细胞的生长都要受温度、渗透压、pH值、无机盐等许多因素的影响，对消毒、配液等均有严格的规范和要求，特别是无菌操作是细胞培养成败的关键。
二、细胞培养的仪器设备 （30′）
1、细胞培养无菌间：
无菌间的环境要求——更衣间、缓冲间及操作间；
设备仪器：可放置超净工作台、倒置相差显微镜、离心机、CO2培养箱。
放置要求： 工作台不紧靠墙壁，不要有水槽
消毒要求：紫外灯消毒，可用新洁尔灭拖地
使用要求：使用前先75%酒精擦拭台面，将培养用品放入台面，然后紫外消毒30分钟；关闭紫外灯，打开吹风机5分钟，可开始使用。在使用过程中凡是进入工作台的器皿表明均用75%酒精擦拭表面；使用完毕后，收拾用品，擦拭台面，紫外照射10分钟-30分钟。
人员进出的要求：注意更换消毒衣、人员自身的清洁，手部的消毒（75%酒精或0.2%新洁尔灭）。
2、细胞培养所需的各种仪器设备：
（1）超净工作台（净化工作台）：操作原理和模式
（2）CO2培养箱、液氮罐、离心机等仪器设备的使用方法和注意事项。
三、细胞培养器皿 （60′）
1、玻璃器材：培养皿、滴流瓶、刻度吸管、离心管、培养瓶、烧杯、量筒、三角烧瓶。
2、金属器材：剪刀（普通剪刀、眼科剪、弯剪、尖剪）、镊子、解剖刀、止血钳等。
3、其他：橡胶器皿、塑料器皿。
4、培养用具的清洗：
（1）玻璃器材的清洗方法：
A、清洁液（重铬酸钾和浓硫酸）浸泡
B、自来水冲数次，洗净，烤干
C、烤干干净玻璃器皿在酸缸 (洗液:浓硫酸+高锰酸钾)浸泡24h以上。
D、自来水冲数次，洗净后分别用一次与二次去离子水冲洗干净
E、烤干，包装
（2）塑料器材的消毒处理方法
用3%HCl或2%NaOH溶液浸泡过夜（单用或交叉处理），水洗，单蒸水，三蒸水浸泡过夜，凉干，紫外线或辐射灭菌
（3）橡皮器材（各种瓶或试管的塞子、盖子）
5%NaOH煮，水洗，4%盐酸煮，水洗8-10次，单蒸水洗三次、二蒸水洗一次。
（4）金属器材：纸擦去表面的油脂，洗衣粉煮沸，或用1%碳酸氢钠煮沸15分钟，水洗， 95%酒精纱布擦干，包装灭菌。
5、培养用液的配制
（1）平衡盐溶液：称量要准确；物质的纯度；物质的可溶性；物质的不稳定性；贮存液。常用： PBS、Hanks、
（2）培养基（维持液、营养液）
目前常用的基础培养液均已商品化，如RPMI1640，MEM，DMEM，F12等，可根据培养需求合理选择，主要成分是氨基酸、维生素、碳水化合物、无机离子及其他一些辅助物质。
配制方法
特殊添加物质：碳酸氢钠、谷氨酰氨、血清等
（3）血清的种类、使用方法、保存：牛血清、马血清等；分装保存在-20℃，4℃下保存时间短；灭活：56℃处理半小时（不推荐）
（4）其他用品：pH调节液、消化液: trypsin-EDTA （0.25%）、抗生素溶液（青霉素100U/ml，链霉素0.1mg/ml）等。
6、培养用品的灭菌 根据不同的材质和要求选择不同的灭菌方法：高压湿热灭菌、过滤除菌、紫外灭菌、高热灭菌。
（1）实验用玻璃血清瓶以牛皮纸包覆瓶盖，高压蒸汽灭菌121℃, 15 lb, 20 分钟，烘干。
（2）吸管、培养瓶、手术器械等置饭盒内高压蒸汽灭菌121℃, 15 lb, 20 分钟，烘干。
（3）液体（能经高压的液体，无生理活性物质、无高温分解挥发物质）用10 % 蒸汽高压灭菌121 ℃, 15lb, 20 分钟处理。
（4）具有生理活性的液体：过滤器过滤除菌。0.22um滤膜。
（5）不能经高温的物品：如塑料制品，酒精消毒后紫外消毒
7、培养用品的分装和保存 分装的原则；保存的方式和温度。
四、分组领取培养用品、分组查阅各种试剂配制方案 （20′）
领取后开始清洗、消毒、灭菌
板书设计：
细胞培养器械、用液和消毒（1）
一、 细胞培养：概念、目的
二、 细胞培养关键：无菌
三、 仪器设备：
无菌间、超净工作台、CO2培养箱、液氮罐、离心机
四、器皿：玻璃、金属、橡胶、塑料
四、 清洗方法
消毒方法
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