| 一、理论讲述 （15′）
1、细胞融合概述：两个以上的细胞合并成为一个双核或多核细胞称为融合细胞。细胞之间不仅能产生同种细胞融合、种间细胞融合，而且也能诱导动植物细胞间产生融合。细胞与组织不同，不排斥异类、异种细胞。
2、细胞融合诱导剂种类很多，一般可分为生物性和化学性两类。常用的主要有灭活的仙台病毒和聚乙二醇(PEG)等。
3、PEG是一种去垢剂，易得，用法简单、融合效果稳定，是目前运用得比较多的一种诱导剂。
4、几类细胞融合方法的优缺点如下：
（1）病毒介导的细胞融合：优点是对细胞毒性较小，融合细胞易于存活；缺点为使用前需要病毒的繁殖与灭活，操作繁琐，如灭活不完全则易对实验人员造成伤害，因此现在一般不使用此方法。
（2）化学介导的细胞融合：优点是操作简便、快速省时且融合效果好；缺点为PEG对细胞有毒性，处理不好则会直接影响融合细胞的存活率。
（3）电激法：优点是对细胞无毒性，且操作简单；缺点为它除需要电融合仪外，还要求实验人员接受一定的技术训练。
二、实验操作 （85′）
（一） 50% PEG液的制备：称取一定量的PEG（WM＝4000）放入烧杯中，沸水浴加热，使之熔化，待冷却至50℃时，加入等体积预热至50℃的GKN溶液，混匀，置37℃备用。
CKN配方：GKN溶液：NaCl 8g，KCl 0.4g，Na2HPO4•2H2O 1.77g，NaH2PO4•H2O 0.69g，葡萄糖2g，酚红0.01g，溶于1000ml水中。
（二）细胞融合：
1、用稀释10倍的鸡红细胞为材料
2、将细胞悬液移入离心管中，以1200转/分5min，（3000转/分离心1min），加入8ml－10ml CKN,再次悬浮细胞，离心洗涤一次，倾去上清液后将离心管倒置于滤纸上，尽量流尽剩余液体（这一步很重要，因为残留液体会改变PEG的浓度）。
3、用手指轻弹离心管底壁，使沉淀物松散。然后吸取制备好的50%PEG 0.4 ml，在37℃水浴中（水浴锅调整38-40度），于90s内逐滴加入离心管中，边加边振摇离心管，使之与细胞混匀。
4、加入1mlCKN液（马上加入或10-20min后加入），轻轻吸打混匀，在37℃水浴中静置5min以稀释PEG。1200转/分5min离心弃去上清液后加入少许CKN，保温在水浴锅中，滴片（如有必要，请用0.2%亚甲基蓝染色），制成临时装片观察
（三）融合过程观察：在显微镜下观察细胞融合的不同阶段。
（四）融合率的计算：制备的临时装片计算融合率。
融合的细胞核数
 融合率 = ╳ 100%
总细胞核数
小结 （20′）
1、细胞融合的原理和常用方法
2、细胞融合实验操作的关键步骤
习题
1、绘制你所观察到的细胞融合各阶段的形态图，按变化顺序排列并说明主要特点。
2、你测定的细胞融合率是多少？
板书设计：
细胞融合
一、 概念
二、 诱导方式
三、 PEG特点
四、 其他方法：病毒、化学、电激
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讲述法
CKN溶液作用
操作法
去除多余液体、弹送沉淀和逐滴加入PEG很重要，是操作成败的关键
离心至少离心1次（以达到去除细胞表面粘附物质的目的,3000转的目的是能把上清液弃干净，第一次可用低速离心，第二次用高速1分钟
4中：如果是做细胞融合培养实验，则加入PEG后90s后加入CKN液；如果是指做融合，不考虑PEG对细胞的毒害，可在PEG之后再水浴一定时间再加入CKN。这里要求各组做时间梯度
讨论法
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