课程

微生物学实验技术

题目

土壤中产碱性蛋白酶细菌的筛选

学时

讲授

实验

3

练习

行课时间

2014年12月18日第3-5节

课次

第7次

教 材

《微生物学实验教程》，张尔亮等主编，西南师范大学出版社

教 具

教 学

目 的

要 求

1.掌握从环境中分离筛选产碱性蛋白酶细菌的原理和方法；

2.熟悉选择培养基的原理和制备方法。

3.了解筛选特定菌株的实验方案的设计程序。

教学重点

难点及其

解决方案

教学重点: 选择培养基的原理和制备方法

教学难点: 选择培养基的原理和制备方法

解决方案：通过实验学生反复训练，对于最后的实验结果教师举例进行分析

参 考

资 料

[1] 钱存柔，黄仪秀. 微生物学实验教程. 北京：北京大学出版社，1999.

[2] 沈萍编. 微生物学实验. 北京：高等教育出版社，2002.

实 施

情 况

小 结

教学过程、内容及时间分配

教学方法与手段

实验七 土壤中产碱性蛋白酶细菌的筛选

一、实验原理（20分钟）

微生物对大分子的纤维素﹑淀粉﹑蛋白质和脂肪不能直接利用，必须靠

产生的胞外酶将大分子物质分解才能被微生物吸收利用。胞外酶主要为水解酶，通过加水裂解大的物质为较小的化合物，使其能被运输至细胞内.如碱性蛋白酶能水解酪蛋白，产碱性蛋白酶细菌菌落在以酪蛋白为碳源的固体培养基上会形成水解圈，从而据此判断细菌能否产生碱性蛋白酶。

二、实验器材及方法

实验器材：（5分钟）

1、筛选培养基： 

蛋白胨1 g，牛肉膏 1 g，NaCl 0.5 g，干酪素1 g，琼脂粉2 g，水100ml，pH9.0 

2、土壤样品

实验方法：

1、培养基的制备 （30分钟）

以干酪素为碳源制备筛选培养基，筛选产碱性蛋白酶细菌。

2、土壤的采集

在学校的灌木丛下，有腐烂树叶的土壤里采集土样5g，放置于装有45毫升无菌水的三角瓶中，震荡混匀。

3、涂布平板与培养（20分钟）

取三角瓶中的浑浊液1毫升，等梯度依次稀释到10-1，10-2，10-3，10-4，10-5，10-6，取10-1，10-2，10-3，10-4，10-5稀释倍数的土样液体0.2毫升分布加入平板中涂布。然后放入37℃培养箱培养48小时后观察。

4、挑取产碱性蛋白酶细菌（20分钟）

测量平板中菌落的水解圈及菌落的直径，并计算Φ透明圈/Φ菌落，挑选比值大的菌落转接平板培养。

5、产碱性蛋白酶细菌的生物学特性观察（25分钟）

菌落形态，革兰氏染色。

三、关键步骤及注意事项

注意无菌操作。

讲授法

讲授法

强调惟一碳源筛选的原理

讲授法