课程

微生物学实验技术

题目

大肠杆菌生长曲线的制作

学时

讲授

实验

3

练习

行课时间

2014年12月4日第3节至5节

课次

第5次

教 材

《微生物学实验教程》第一版，主编：张尔亮，西南师范大学出版社，2012

教 具

教 学

目 的

要 求

1. 掌握用比浊法测定细菌的生长曲线；

2. 熟悉细菌生长曲线的特点及测定原理；

3、了解微生物的计数方法。

教学重点

难点及其

解决方案

教学重点: 光电比浊法测量细菌数量的方法

教学难点: 细菌生长曲线的测定和绘制

解决方案：通过实验加深学生理解原理；训练良好的实验操作习惯。分析实验结果，及时纠正学生的错误。

参 考

资 料

[1] 钱存柔，黄仪秀. 微生物学实验教程. 北京：北京大学出版社，1999.

[2] 沈萍编. 微生物学实验. 北京：高等教育出版社，2002.

实 施

情 况

小 结

教学过程、内容及时间分配

教学方法与手段

实验六 大肠杆菌生长曲线的测定

一、实验原理（20min）

将少量细菌接种到一定体积的、适合的新鲜培养基中，在适宜的条件下进行培养，定时测定培养液中的菌量，以菌量的对数作纵坐标，生长时间作横坐标，绘制的曲线叫生长曲线。它反映了单细胞微生物在一定环境条件下于液体培养时所表现出的群体生长规律。依据其生长速率的不同，一般可把生长曲线分为延缓期、对数期、稳定期和衰亡期。

测定微生物的数量有多种不同的方法。本实验采用比浊法测定，由于细菌悬液的浓度与光密度（OD值）成正比，因此可利用分光光度计测定菌悬液的光密度来推知菌液的浓度，并将所测的OD值与其对应的培养时间作图，即可绘出该菌在一定条件下的生长曲线。 

二、实验材料及方法（100min）

实验材料 
菌种：大肠杆菌 
培养基：牛肉膏蛋白胨培养基 
仪器和器具：721分光光度计，比色皿，摇床。 
实验方法   

步骤：菌液→标记→接种→培养→测定 

1、制备菌液：取大肠杆菌斜面菌种1支，接入牛肉膏蛋白胨培养液中（100ml/250ml），静置培养18h。 

2、标记编号：取试管10个，每支试管装6ml液体培养基，分别编号为：空白、0、1、3、5、7、9、11、24、48h。
   3、接种培养：用移液枪吸取0.5ml菌液加入试管中，于37℃下振荡（130r/m）培养。然后分别按对应时间取出试管，立即放冰箱中4℃保存，待培养结束后一同测定O.D值。 

4、生长量测定：将未接种的牛肉膏蛋白胨培养基（空白）倾倒入比色皿中，选用600nm波长分光光度计上调节零点，作为空白对照，并对不同时间培养液从0 h起依次进行测定，对浓度大的菌悬液用未接种的牛肉膏蛋白胨液体培养基适当稀释后测定，使其OD值在0.2～0.8以内，经稀释后测得的OD值要乘以稀释倍数，才是培养液实际的OD值。 
   5、绘制生长曲线：以培养时间为横坐标，以O.D值为纵坐标绘制生长曲线。

讲授法

重点讲解光电比浊法的原理，生长曲线的原理。

讲授法

教学过程、内容及时间分配

教学方法与手段

三、关键步骤及注意事项

1、 注意无菌操作，避免杂菌污染。

2、 菌液在测量之前要充分摇匀。

讲授法