课程

微生物学实验技术

题目

无菌操作与接种技术

学时

讲授

实验

3

练习

行课时间

2014年9月26日第6－8节

课次

第4次

教 材

《微生物学实验教程》，张尔亮等主编，西南师范大学出版社

教 具

教 学

目 的

要 求

掌握斜面接种、平板划线接种方法及液体和半固体培养基接种技术；

熟悉不同的微生物在斜面上、半固体培养基和液体培养基中的生长特征；

了解几种常用的分离纯化微生物的基本操作技术。

教学重点

难点及其

解决方案

教学重点: 无菌操作和接种技术

教学难点: 无菌操作和接种技术

解决方案：通过实验操作，加深学生对实验原理的理解，最终掌握实验方法。对实验结果要进行深入分析，及时纠正学生的不正确操作。

参 考

资 料

[1] 钱存柔，黄仪秀. 微生物学实验教程. 北京：北京大学出版社，1999.

[2] 沈萍编. 微生物学实验. 北京：高等教育出版社，2002.

实 施

情 况

小 结

教学过程、内容及时间分配

教学方法与手段

实验四 无菌操作与接种技术

一、实验原理（15分钟）

细菌的接种方法因各种培养基不同而异，常用的方法有平板、斜面、液体和半固体接种。

二、实验材料及方法

实验材料

1．琼脂斜面、琼脂平板、肉汤培养基。

2．葡萄球菌、大肠杆菌斜面培养物。

实验方法

（一）平板接种法（50分钟）

1．分区划线法：

(1) 烧灼接种环，冷却后，取1环接种菌液。

(2) 打开平板盖，左手斜持平板(约45°角)，并靠近火焰，以免空气中杂菌落入平板内，右手握持已沾菌液的接种环在琼脂平板一端连续平行划线(约占平板面积的1/3)，为第1组线。划线时，接种环与平板成30～40°，轻轻接触平板，以腕力平行滑移接种环，注意避免将环嵌人琼脂将其划破。

(3) 转动平板约70°，接种环烧灼灭菌冷却后，从原接种处通过2～3条线，划于另一个1/4的面积为第2组线。划毕，接种环又烧灼灭菌，冷却后同法划出第3、4组线。

(4) 接种完毕，盖上皿盖，于皿底做好标记，将平板倒置(平板底面朝上)，置37℃培养18～24h，观察结果。

分区划线法（左）及菌落分布示意图（右）

讲授法

讲授法

详细讲解接种平板的连续划线方法。

教学过程、内容及时间分配

教学方法与手段

2．平行划线法：

平板连续划线法（左）及菌落分布示意图（右）

（二）琼脂斜面接种法（25分钟）

多用于纯种细菌的增菌和保存菌种。

1．用灭菌接种针取细菌培养物少许。

2．拔出培养管硅胶塞，管口经火焰灭菌，将沾有细菌的接种针伸入试管中。

3．将接种针自下而上在琼脂上平行划线。

4．接种后，管口在火焰上灭菌，塞回硅胶塞，接种环灭菌。

5．在试管壁近管口处做好标记，置37℃培养18～24h，观察结果。  

（三）肉汤接种法（25分钟）

用于增菌。

1．灭菌接种环取细菌培养物少许。

2．以无菌操作将沾有细菌的接种环伸入肉汤管中，将环上细菌轻轻研磨于接近液面的管壁上，然后将试管稍倾斜，使肉汤碰及细菌，将细菌带入培养基中。

3．接种后管口灭菌，塞回硅胶塞，接种环灭菌，并做好标记，置37℃培养18～24h，观察结果。

三、关键步骤及注意事项（5分钟）

1．接种时注意打开的试管或平板口要置于酒精灯外焰2厘米范围内，避免污染杂菌。

2.任何接种工具在进入纯培养或无菌器物之前都要严格烧灼灭菌；烧灼前最好用酒精消毒棉擦拭接种工具，然后烧灼。 

讲授法

讲授法

详细讲解从斜面接种斜面，斜面接种平板。

讲授法

斜面接种液体培养基，液体培养基接种液体培养基的方法。

讲授法