课程

微生物学实验技术

题目

培养基制备及微生物生长条件

学时

讲授

实验

3

练习

行课时间

2014年9月19日第6－8节

课次

第3次

教 材

《微生物学实验教程》，张尔亮等主编，西南师范大学出版社

教 具

教 学

目 的

要 求

掌握培养基的原理和配制培养基的一般方法和步骤；环境因素影响微生物生长的原理，抗菌谱试验的基本方法；

熟悉高压蒸汽灭菌的操作方法；

了解干热灭菌，紫外线灭菌和滤过除菌的原理和方法；紫外线和化学药剂的杀菌作用，常用化学消毒剂对微生物的作用。

教学重点

难点及其

解决方案

教学重点: 培养基的制备，常见清毒灭菌方法

教学难点: 培养基的制备，常见清毒灭菌方法

解决方案：通过实验操作，加深学生对实验原理的理解，最终掌握实验方法。对实验结果要进行深入分析，及时纠正学生的不正确操作。

参 考

资 料

[1] 钱存柔，黄仪秀. 微生物学实验教程. 北京：北京大学出版社，1999.

[2] 沈萍编. 微生物学实验. 北京：高等教育出版社，2002.

实 施

情 况

小 结

教学过程、内容及时间分配

教学方法与手段

实验三 培养基制备及微生物生长条件

培养基制备

一、实验原理（10分钟）

培养基是人工配制的供微生物生长繁殖和合成代谢所需要的营养物质，包括碳源、氮源、无机盐、生长因子和水。适宜的培养基除了含有细菌生长和繁殖所需的营养物质，还要有合适的酸碱度，澄清且无菌。培养基按其物理性状分为固体、半固体和液体培养基。按其用途，可分为基础培养基、营养培养基、选择培养基、鉴别培养基及厌氧培养基等。

牛肉膏蛋白胨培养基是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基。

高压蒸汽灭菌法是灭菌效果最好，使用最广泛的方法之一。

二、培养基的制备方法（20分钟）

牛肉膏蛋白胨培养基配方：

牛肉膏 5g    蛋白胨 10g

氯化钠 5g    琼脂 20 g（液体培养基不加）  水 1000ml

操作步骤：

1.称量→溶化→调pH→过滤→分装→加塞→包扎→灭菌

2.高压蒸汽灭菌：加水→装物品→加盖→加热→排冷空气→加压→恒压→降压回零→排汽→取物

三、实验室常用消毒灭菌方法（50分钟）

生物超净工作台的使用

高压蒸汽灭菌锅的使用

四、关键步骤及注意事项

1.注意按照配方配制培养基；固体培养基需要加入2％琼脂。

2.高压灭菌时要注意充分排出冷空气后再关闭排气阀；灭菌完后取物前一定要将压力降到零点。 

讲授法

培养基的概念，基本组成，类型

实验操作

重点讲解高压蒸汽锅的使用

讲授法

教学过程、内容及时间分配

教学方法与手段

微生物生长条件

一、实验原理（10分钟）

微生物的生长繁殖需要一定的温度条件，每种微生物都有它的生长温度范围，若温度超过最高或低于最低生长温度时，微生物均不能生长或处于休眠状态甚至死亡。根据微生物最适生长温度可将微生物分为低温菌、中温菌和高温菌。大多微生物为中温菌，适于25-40度之间，故实验室常采用28-30度培养。若要确定某种微生物的最适生长温度应该进行测定。

紫外线可以引起细胞核酸变性，对微生物有强烈的致死作用，波长260nm的紫外线杀菌作用最强。但其穿透力弱，只限于进行物体表面或接种室的空气灭菌。经过紫外照射的受损细胞遇光会有光复活现象，故处理后的接种物应避光培养。

抗生素对一些微生物的生长有抑制或杀灭作用。利用药物敏感试验可以通过抑菌圈测定微生物对某种抗生素的敏感性。

二、实验器材及方法（30分钟）

实验器材：

1、 培养基：牛肉膏蛋白胨培养基

2、 试剂：药敏片

3、 菌种：大肠杆菌、白色葡萄球菌

实验方法：

实验器材：

培养基：牛肉膏蛋白胨培养基；试剂：药敏片；菌种：大肠杆菌、白色葡萄球菌

实验方法：

温度对微生物生长的影响 

将大肠杆菌或白色葡萄球菌的菌液0.5ml接种液体培养基，分别于4度、室温、28度、37度静置培养48h观察生长情况（721分光光度计测定O.D值），确定其生长最适温度。

酸碱度对微生物生长的影响 

将大肠杆菌或白色葡萄球菌的菌液0.5ml接种pH分别为4、6、7、8、9的液体培养基，摇床120r/m培养24h，观察生长情况（721分光光度计测定O.D值），确定其生长最适pH。

紫外线杀菌试验

    将大肠杆菌或白色葡萄球菌涂布接种在平板培养基上，然后用无菌镊子夹取无菌五星牛皮纸小心放在接种好的平皿中央。再将平皿分组置于紫外灯下，打开平皿，在30cm距离处照射。一组照1min，一组照5min，一组照20min，小心取下牛皮纸，盖上平皿。用黑布或厚纸遮盖37度培养24小时观察结果。

讲授法

强调微生物的生长条件

讲授法

教学过程、内容及时间分配

教学方法与手段

药敏试验

将大肠杆菌或白色葡萄球菌涂布接种在平板培养基上，然后用无菌镊子夹取药敏片均匀放置在平板上，37度培养24小时观察有无抑菌圈和抑菌圈大小。

三、关键步骤及注意事项：

注意无菌操作。

注意紫外杀菌试验需用黑布或厚纸遮盖37度培养。

讲授法