课程

微生物学实验技术

题目

革兰氏染色

学时

讲授

实验

3

练习

行课时间

2014年9月12日第6－8节

课次

第2次

教 材

《微生物学实验教程》，张尔亮等主编，西南师范大学出版社

教 具

ppt

教 学

目 的

要 求

掌握革兰氏染色方法；

熟悉革兰氏染色原理；

了解革兰氏染色法在细菌分类鉴定中的重要性。

教学重点

难点及其

解决方案

教学重点: 革兰氏染色方法

教学难点: 革兰氏染色方法的原理

解决方案：通过实验操作，加深学生对实验原理的理解，最终掌握实验方法。对实验结果要进行深入分析，及时纠正学生的不正确操作。

参 考

资 料

[1] 钱存柔，黄仪秀. 微生物学实验教程. 北京：北京大学出版社，1999.

[2] 沈萍编. 微生物学实验. 北京：高等教育出版社，2002.

实 施

情 况

小 结

教学过程、内容及时间分配

教学方法与手段

实验二 革兰氏染色

一、实验原理（20分钟）

革兰染色法是最常用的细菌鉴别染色法。同时还为分析细菌的致病性和选用抗菌药物提供了依据。

革兰染色的原理，主要是由于两类细菌的细胞壁成分和结构的不同。革兰阴性菌细胞壁中含有较多类脂质，而肽聚糖含量较少。当用酒精脱色时，溶解了类脂质，增加了细胞的通透性，使结晶紫和碘的复合物易于渗出，细胞脱色，经复染后，染上复染液(复红)的颜色；而革兰阳性菌细胞壁中肽聚糖含量多且交联度大，类脂质含量少，经酒精脱色后，肽聚糖层的孔径变小，通透性降低，酒精不易进入菌体脱色，故细胞仍保留初染液(结晶紫)的颜色。

二、实验材料及方法

实验材料（5分钟）

1．葡萄球菌和大肠杆菌18～24h混合培养物。

2．革兰氏染色试剂。

实验方法（90分钟）

1．制作细菌涂片、干燥、固定。

2．初染：涂片上加结晶紫染液数滴，染色lmin，用水冲去染液，甩干。

3．媒染：加卢戈氏碘液数滴，1min后水洗，甩干。

4．脱色：加95%酒精，频频摇动玻片，直到不再溶下染料为止，约30s，水洗，甩干。

5．复染：加1%复红染液1min，水洗，甩干。

6．用毛坯纸或滤纸轻轻印干，待标本充分干燥后用油镜观察。

三、关键步骤及注意事项（5分钟）

1．要掌握好染色的时间，尤其是酒精脱色时间，不宜过长或过短。

2．选用18～24h培养物为宜，否则影响染色效果。

讲授法

注意讲解革兰氏染色的原理：肽聚糖与脂类的含量不同导致不同的染色结果

实验操作

注意干燥，脱色操作要严格遵照实验指导要求。

讲授法