课程

生物化学与分子生物学实验

题目

谷丙转氨酶活力测定

学时

讲授

实验

3

练习

行课时间

课次

教 材

《生物化学与分子生物实验学》，宋海星，科学出版社，2012年

教 具

多媒体课件

教 学

目 的

要 求

掌握谷丙转氨酶作用原理，酶活力的定义和测定方法。

熟悉转氨酶在代谢过程中的重要作用及其在临床诊断中的意义。

了解肝脏疾病的相关标志物和人类疾病的酶学标志物。

教学重点

难点及其

解决方案

教学重点: 转氨酶活性测定原理和种类

教学难点: 测量方法的应用范围

解决方案：基本操作技术通过采取面对面，一对一的形式进行教学指导，鼓励学生反复训练

参 考

资 料

1. 王镜岩主编，生物化学（第三版），高等教育出版社，2004年

2. 孙培龙、吴石金 主编，生物化学技术实验指导，化学工业出版社，2008年

3. 高继国、郭春绒 主编，普通生物化学教程实验指导，化学工业出版社，2009年

实 施

情 况

小 结

教学过程、内容及时间分配

教学方法与手段

一、相关理论知识（10 min） 

• 体内蛋白质处于不断降解与合成的动态平衡；

• 食物蛋白质经消化吸收的氨基酸和体内组织蛋白质降解产生的氨基

酸混在一起，分布于体内各处，作为参与代谢的氨基酸库；

• 氨基酸分解代谢的主要反应是脱氨基作用；

• 肝脏的脱氨基方式有：氧化脱氨基,氨基转换作用及联合脱氨基.

二、实验原理(10 min)

血清中丙氨酸氨基转移酶(谷－丙转氨酶)作用于丙氨酸及α-酮戊二酸，产生丙酮酸和谷氨酸。在一定的条件下，血清GPT越多，则反应速度越快，在一定的时间内产生的丙酮酸也就越多（一般常以丙酮酸的产量来代表血清GPT活性的大小）。丙酮酸与2，4－二硝基苯肼反应，生成丙酮酸－2，4－二硝基苯腙、丙酮酸－2，4－二硝基苯腙在酸性溶液中呈黄色，加碱后呈棕红色，与标准夜进行比色，以计算酶活性单位。

COOH         CH3                 COOH                CH3

(CH2)2  +   HC—NH2             (CH2)2     +         C=O

C=O          COOH               HC—NH2              COOH

COOH                             COOH               

α-酮戊二酸    丙氨酸                谷氨酸               丙酮酸 

三、临床意义(5 min)

• GPT在肝细胞内活性最高，比血清高100倍，当有1％的肝细胞坏死时，可使血清内酶活性升高1倍。

• GPT是肝细胞受损最敏感的指标之一

• 肝炎：病毒性肝炎的潜伏期、急性发病期，以及隐性感染者均可有血清谷丙转氨酶升高，且往往是GPT单项升高

• 如果GPT血清值超过正常上限2－3倍，并持续两周以上，表明有肝胆疾病存在的可能。

• 参考范围：0-50 U/L，卡门氏单位0-25 KarU。

四、实验材料(2 min)

【试剂】 

• （R1）基质液  L-丙氨酸及α-酮戊二酸

• （R2）显色剂  2,4-二硝基苯肼

• （R3）NaOH

引入法：通过讲解相关背景知识引出今天学习的意义及目的。

结合PPT讲解

结合临床应用进行讲解

教学过程、内容及时间分配

教学方法与手段

【器材】  

试管及试管架、刻度吸管（0.1ml，0.5ml，1ml及5ml）、电热恒温水浴箱、紫外可见分光光度计。

五、操作步骤( 10 min)

1. 标准曲线绘制：以各管酶活力单位的对数为横坐标，对应的吸光度为纵坐标，绘制工作曲线图。

混匀，室温恒定3分钟， 505nm波长，0号管调零，测定各管吸光度，制作工作曲线。

2. 血清GPT活性测定

混匀，室温恒定3分钟， 505nm波长，空白管调零，测定各管吸光度。

结合表格进行讲解：虽然标准曲线不用学生做，但是要详细讲解为什么这么做以及每种试剂的作用。

标准曲线：y=0.0027x-0.0115 （x:酶活性；y:A值）

注意事项

• 2，4-二硝基苯肼可

与有酮基的化合物作用形成苯腙硝醌化合物

• 溶血标本不宜采

用，因血细胞内转氨酶活力较高，影响测定结果。

• 在测定时，如酶活

力较大（ 大于150KarU ），应将样品稀释后再进行测

定

教学过程、内容及时间分配

教学方法与手段

六、学生们动手操作(78 min)

分组进行实验操作

小结（5 min）

掌握谷丙转氨酶作用原理，酶活力的定义和测定方法；熟悉转氨酶在代

谢过程中的重要作用及其在临床诊断中的意义；了解肝脏疾病的相关标志物和人类疾病的酶学标志物。

思考题：

1. 为什么在制作标准曲线时要加入基质液？

2. 为什么在制作标准曲线时加入基质液的体积不同，对反应没有影响？

总结归纳法：总结本次课程的重难点

理论联系实际：给学生布置思考题，以提高学生们解决问题的能力。