课程

生物化学与分子生物学实验

题目

DNA定量测定

学时

讲授

实验

3

练习

行课时间

课次

教 材

《生物化学与分子生物实验学》，宋海星主编，科学出版社，2012年9月第一版

教 具

多媒体

教 学

目 的

要 求

掌握：DNA定量测定的基本原理及操作；

熟悉：定糖法和定磷法测定DNA的区别；

了解：RNA的定量测定方法；

教学重点

难点及其

解决方案

教学重点: 核酸基本定量操作

教学难点: 掌握DNA定量测定的基本原理和方法，对比RNA的含量测定方法及原理

解决方案：基本操作技术通过采取面对面，一对一的形式进行教学指导，鼓励学生反复训练

参 考

资 料

1. 《生物化学》，王镜岩主编，高等教育出版社，2002年8月第三版。

2. 《生物化学技术实验指导》，孙培龙、吴石金主编，化学工业出版社，2008年8月第一版。

3. 《分子生物学实验技术》，屈伸、刘志国主编，化学工业出版社，2008年1月第一版。

实 施

情 况

小 结

教学过程、内容及时间分配

教学方法与手段

一、核酸定量操作简介和安全要求（10分钟）

二、复习核酸的基本知识和理论。（10分钟）

脱氧核糖核酸中的2-脱氧核糖在酸性环境中与二苯胺试剂一起加热产生蓝色反应，在595nm处有最大光吸收。 DNA在40-400g范围内，光吸收与DNA的浓度成正比。在反应液中加入少量乙醛，可以提高反应灵敏度。除DNA外，脱氧木糖、阿拉伯糖也有同样反应。其他多数糖类，包括核糖在内，一般无此反应。

三、实验操作（90分钟）：

1、DNA标准曲线的制定

取10支试管，分成2组，依次加入0.4、0.8、1.2、1.6和2.0mLDNA标准溶液。添加蒸馏水，使之都成2mL。另取2支试管，各加2mL蒸馏水作为对照。然后各加入4mL二苯胺试剂，摇匀。于60℃恒温水浴中保温1小时，冷却后于595nm处进行比色测定。取两管平均值，以DNA浓度为横坐标，光吸收值为纵坐标，绘制标准曲线。

2、制品的测定

取2支试管，各加2mL待测液（内含 DNA应在标准曲线的可测范围之内）和4mL二苯胺试剂，摇匀。其余操作同标准曲线的制作。

3、DNA含量的计算

根据测得的光吸收值，从标准曲线上查出相当该光吸收值DNA的含量，按下式计算出制品中DNA的百分含量：

四、小结（10分钟）

总结并比较定磷法和定糖法的不同。

板书：

一、核酸定量操作简介和安全要求。

二、复习核酸的基本知识和理论。

三、实验操作

PPT

定糖法与定磷法

讲述法：详细讲述实验操作的步骤及注意事项