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一、 实验原理（15min）
本实验采取的碱裂解法分离质粒的原理：在pH12.0~12.6碱性
环境中，线性的大分子量细菌染色体DNA变性，而共价闭环（CC）质粒DNA仍为自然状态。将pH调至中性并有高盐浓度存在的条件下，染色体DNA之间交联形成不溶性网状结构。大部分DNA和蛋白质在去污剂SDS的作用下形成沉淀，而CC质粒DNA仍然为可溶状态。通过离心，可去除大部分细胞碎片染色体DNA、RNA及蛋白质，质粒DNA尚在上清中，分离上清，用两倍体积乙醇或一倍体积的异丙醇沉淀质粒DNA
二、实验步骤（25min）
1． 活化菌株：挑取单菌落于LB平板上，37 ℃培养48 h
2． 挑取单菌落，接种到2～3 mLLB液体培养基中（含适当的抗生素），37 ℃、150 r/min，培养10h左右；
3． 取1.5 mL LA培养液于1.5 mL Eppendorf 管中，12 000 r/min，离心2 min，弃上清；
4． 将EP管的管口朝下放置在滤纸上，让培养液滴干净。
5． 将细菌沉淀悬浮于100μl的溶液I中，强烈振荡（用涡旋仪）混匀,盖子打开，室温放置5min。
6． 再加入200μl溶液II，盖严管盖颠倒EP管5次以混合内容物，不要强烈振荡，并在冰浴中放置5 min。
7． 加入150 μl溶液III，颠倒3～5次，并在冰浴中放置5 min；加入400μl等体积苯酚-氯仿，振荡混匀。
8． 12 000 r/min离心3～5 min, 弃沉淀、吸取上清液于另一新EP管中，并加入上清体积2倍的无水冰乙醇（- 20 ℃保存），于 - 20 ℃下静置10 min；
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