课程

生物化学与分子生物学实验

题目

PCR实验

学时

讲授

实验

3

练习

行课时间

课次

教 材

《生物化学与分子生物实验学》，科学出版社出版，宋海星主编，2012年

教 具

ppt（多媒体课件）

教 学

目 的

要 求

掌握PCR反应的基本原理与实验技术；

熟悉PCR仪的使用；

了解PCR技术的相关类型和种类；

教学重点

难点及其

解决方案

重点：PCR反应的基本原理和实验技术

难点：PCR实验试剂作用与成分

解决方案：详细讲授各试剂成分，作用与理论相结合，利用实例、图片讲解。通过课堂讲授、实验示教，加深该章内容的理解.

参 考

资 料

分子克隆（冷泉港出版社）、基因（第八版）

实 施

情 况

小 结

教学过程、内容及时间分配

教学方法与手段

多聚酶链式反应类似DNA分子的天然复制过程。在待扩增的片段两侧和 与其两侧互补的两个寡核苷酸引物，经变性、退火和延伸若干个循环后，DNA扩增2n倍。  

[教学内容]   

1. PCR 原理和多种PCR方法及其应用介绍

2. 学习引物的设计

3. 利用PCR技术扩增一已知的基因片段

4. 电泳检测PCR产物

[实验材料和用品]  

  PCR扩增仪、琼脂糖凝胶电泳系统、DNA模板、引物1、引物2、dNTP、Taq酶、Eppendorf管等

[实验步骤]

标准的PCR反应体系： 

　　　　　　 10×扩增缓冲液 　        2ul

　　　　　　 dNTPs（10mM）混合物 　 5ul

　　　　　　 引物 　　　　 　      各1 ul　

　　　　　　 模板DNA 　　　 　      1 ul　

　 　　　　　Taq DNA聚合酶 　       2 ul　　

　　　　　　 Mg2+　           　　　2 ul　　   

　　　　　　 加双或三蒸水至 　       20ul   

     反应：

94℃预变性              4min，

94℃变性                30sec

55℃退火                45sec       ×30 c

72℃延伸                1min

72℃充分延伸            7min

4℃保存

小结：

PCR原理一定要讲透

试剂成分与作用要清晰

PCR仪器使用及程序设计尽量满足大多数学生的学习和掌握