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实验1分子生物学基本知识与操作
2015-07-25 02:07  

      案 首 页

 

2013 级 生物制药 本科班                              任课教师:  郝军莉

课程

分子生物学

实验技术

题目

分子生物学基本知识与操作

学时

讲授

 

实验

3

练习

 

行课时间

2015年4月21日 第1-3节

课次

1

教 材

生物化学与分子生物学实验科学出版社,杨建雄,2008

教 具

ppt

教 学

目 的

要 求

1、掌握分光光度计、离心机微量加样器等常规仪器的使用;

2、实验室规则和常用分子生物学仪器名称

3、了解分光光度计、离心机等仪器设备的工作原理一般维护。

教学重点

难点及其

解决方案

教学重点实验室安全规章,基本仪器使用

教学难点: 分光光度计原理和操作

 

解决方案:理论讲授,教师带教演示仪器使用

参 考

资 料

1. 魏群 主编,分子生物学实验指导,高等教育出版社,2010

2. 郑伟娟 主编,现代分子生物学实验,高等教育出版社,2008

3. 李钧敏 主编,分子生物学实验,浙江大学出版社,2009

 

实 施

情 况

小 结

 

 

教研室主任签名:                                                       年    月    日

      案 续 页

教学过程、内容及时间分配

教学方法与手段

1.1 分子生物学实验技术发展简史

20年代 微量分析技术导致了维生素、激素和辅酶等的发现。

30年代 电子显微镜技术打开了微观世界,使我们能够看到细胞内的结构和生物大分子的内部结构。 

40年代 层析技术大发展, “电泳技术”由瑞典的著名科学家Tisellius所奠基,从而开创了电泳技术的新时代。

    50年代 “放射性同位素示踪技术”在50年代有了大的发展,为各种生物化学代谢过程的阐明起了决定性的作用。1953DNA双螺旋的发现开创分子生物学新时代

 60年代 各种仪器分析方法用于生物化学研究,取得了很大的发展

70年代 基因工程技术取得了突破性的进展,ArberSmithNathans三个小组发现并纯化了限制性内切酶,1972年,美国斯坦福大学的Berg等人首次用限制性内切酶切割了DNA分子,并实现了DNA分子的重组。1973年,又由美国斯坦福大学的Cohen等人第一次完成了DNA重组体的转化技术

8090年代:Sanger和美国哈佛大学的Gilbert分别设计出两种测定DNA分子内核苷酸序列的方法,而与Berg共获诺贝尔化学奖

1.2 实验室规则

    ⑴ 实验前必须认真预习实验内容,明确本次实验的目的和要求,掌握实验原理,写好实验预习报告,否则,不能进行实验。

     实验时自觉遵守实验室纪律,保持室内安静,不大声说笑和喧哗。

    ⑶ 实验过程中要听从教师指导,认真按照实验步骤和操作规程进行实验。若想改进和设计新的实验方法,必须取得教师的同意。实验时认真进行实验记录,实验完毕及时整理数据,按时上交实验报告。

     实验台面、称量台、药品架、水池以及各种实验仪器内外都必须保持清洁整齐,药品称完后立即盖好瓶盖放回药品架,严禁瓶盖及药勺混杂,切勿使药品(尤其是NaOH)洒落在天平和实验台面上,毛刷用后必须立即挂好,各种器皿不得丢弃在水池内。

    ⑸ 配制试剂和用无离子水要注意节省,按实验实际使用量配制,多余的重要试剂和各种有机试剂要按教师要求进行回收,昂贵的SephadexSepharose凝胶和DEAE纤维素等,用后必须及时回收,不得丢弃。

 

讲授15min

 

 

 

 

 

 

 

 

 

重点介绍10min

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

结合实验室事故讲授25min

      案 续 页

教学过程、内容及时间分配

教学方法与手段

722型分光光度计操作规程:

   1. 将灵敏度旋钮调置“1”档,(放大倍率最小)。

   2. 开启电源,指标灯亮,选择开关置于“T”。

   3. 打开试样室盖(光门自动关闭),调节“0T”旋钮,使数字显示为“000.0”。

   4. 将装有溶液的比色皿放置比色架中。

   5. 旋动仪器波长手轮,把测试所需的波长调节至刻度线处。

   6. 盖上样品室盖,将参比溶液比色皿置于光路,调节透过率“100”旋钮,使数字显示为100T(如果显示不到100T,则可适当增加灵敏度的挡数。同时应重复“3”,调整仪器的“000.0”)。

   7. 将被测溶液置于光路中,数字表上直接读出被测溶液的透过率(T)值。

   8. 吸光度A的测量,参照“3”“6”调整仪器的“000.0”和“100.0”将选择开关置于A旋动吸光度调零旋钮,使得数字显示为0.000,然后移入被测溶液,显示值即为试样的吸光度A值。

   9. 浓度C的测量,选择开关由A旋至C,将已标定浓度的溶液移入光路,调节浓度旋钮,使得数字显示为标定值,将被测溶液移入光路,即可读出相应的浓度值。

各种仪器的使用注意事项

 (一)高速冷冻离心机

   1. 未经过培训和考核者不能使用。

   2. 选择合适的转头和转速,绝不可超速使用。

   3. 选择合适的温度,通常4℃,除有机溶剂外不要低于零下,以免冰冻,损坏离心管和转头。

   4. 转头使用前必须用擦孔棒将管孔擦净,并仔细检查有无裂痕和孔底白斑。若有,转头报废。

   5. 离心管内装载的溶液量必须合适,不锈钢管无盖,只能装23,塑料管可装至“肩”部。管盖必须盖严绝不允许漏液。空管离心会变形。塑料管使用有机溶剂必须符合规定。

   6. 离心管必须成对或成△形放置,必须严格平衡,偏差<0.1g

   7. 不允许无转头空转,放取转头必须用手柄,以防转头滑落。转头要轻放、卡稳,旋下手柄时要用手扶住手柄只转转头。转头盖要盖严,无盖不准离心。

   8. 离心时不准打开机盖,不准扒扶在离心机上,如有异常声音和振动时立即停机。

   9. 转头使用后必须及时由转头室中取出、擦干,用擦孔棒将管孔仔细擦净。如有溶液溢出必须清洗干净,擦净转头室内凝水,开门凉干转头室。

   10. 使用离心机必须予约,用后必须登记。

 

722型分光光度计讲授25min

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

讲授35min

 

教学过程、内容及时间分配

教学方法与手段

(二)普通离心机

1. 离心前必须仔细检查转头各孔内有无异物。

2. 离心管必须仔细平衡。

3. 机内若不清洁,离心管要用塑料薄膜封口。

4. 必须慢起动,然后加速。

5. 离心时不准开盖。

6. 不准用手刹车。

 (三)分光光度计

1. 必须正确使用比色皿。

1)不可用手、滤纸、毛刷等摩擦透光面,只能用绸布和擦镜纸擦。

2)必须彻底洗净,塑料杯染了色,必须及时用乙醇荡洗,绝不可用乙醇、丙铜浸泡。

3)杯内溶液不可盛的过满过少。

4)拖动池架要轻,要到位。

5)杯内废液要倒入废液瓶,绝不允许洒在地上。

6)要区分参比杯和样品杯,不可随意互换。

7)石英杯不准放在台面上。只准放在仪器内或盒内,以防打破。

2. 光源的反光镜拨杆要放置正确、到位。

    3. 753752722的显示窗不可长时间溢出。

4. 仪器用完毕必须及时关闭全部电源,要节约氘灯的使用。

 

小结:实验室安全与操作规则

 

简要板书:

1. 实验室管理与使用原则

2. 实验室安全

3. 实验室主要仪器设备的使用和维护

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

小结10min

 

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